尼康和佳能两家的对焦系统从进入AF时代以来就是各有胜负,一般认为佳能对焦点多,速度快而尼康的则是暗部对焦能力强,焦点精确,正常的使用环境中是感受不到两家有什么区别的,不过佳能占了USM马达的优势,因此总给人迅捷宁静的印象,而尼康仍然保留着机身驱动的方式,对焦马达工作时吱吱乱响总让人觉得它对焦速度会慢些,实际上差距不大。在对焦能力上的差别是由对焦模块决定的,佳能以CMOS作为对焦检测元件,因此具有功耗低,响应快,体积小的特点,所以能在EOS 1V那小小的反光镜箱底部做进去45点对焦系统,几乎覆盖整个取景器,但CMOS的缺点就是对暗部细节不敏感,所以佳能机身对焦工作照度一般都是1EV-8EV,而尼康使用CCD作为对焦检测元件,暗部对焦能力很强,但是功耗比较高,体积比较大,因此之前最多只做到了D2X的11焦点。

D300的51点对焦系统对焦点位置示意图,白框是D300的51点对焦系统,黄框是D2的11点,蓝绿色框是D1的5点
这次在D300上使用的51点对焦模块Multi-CAM 3500DX对于尼康自己来说也是一个不小的突破,Multi-CAM 3500DX拥有51个对焦检测点,其中有15个十字对焦点,可以工作在-1EV-8EV的照度之下,可以配合最大光圈F5.6以上的镜头正常工作,而且还可以保证使用最大光圈在F2.8以上的镜头时也能获得精确的对焦。这一点需要强调一下,光圈越大的镜头虽然通光量变大,但是景深范围也响应变浅了,检测焦点的难度非常大,需要更精确的对焦检测模块配合才能获得精确的焦点,此前爆出对焦精度问题的佳能EOS 1D Mark III就是在这个问题上栽了跟头。有资料表明尼康Multi-CAM 3500对焦模块的检测方式是先使用F5.6的检测点进行粗略对焦,然后再使用F2.8的检测点精确对焦确定焦点。

尼康D300搭载了Multi-CAM 3500对焦模块,不过Multi-CAM 3500的51个对焦点全部挤在取景器中间的一块儿,覆盖范围比D2X的11点在横向上还要小一点。
尼康D300具有3D追踪功能,可以对焦点进行追踪对焦,但是在出现焦点遮挡的时候,追踪对焦可能导致失误。尼康D300会对连续对焦的主体色块进行锁定,并且提供切换对焦目标的灵敏程度,但是在反差比较小的场景下也有可能导致追踪失效,一般情况下这个3D追踪功能还是非常实用的,能跟踪焦点,合焦迅速,合焦的成功率非常高。